ECL化學化學(xué)發光底物(超敏)可為使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯物的(de)免疫印跡實驗提供明亮的信號和低皮克級檢(jiǎn)測靈敏度。 該ECL底(dǐ)物能夠兼容各種膜、封閉液和寬範圍抗體(tǐ)稀釋液,以出色性能、通用性和高性價比(bǐ),滿足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。
操(cāo)作(zuò)步驟:
1、執行常規SDS-PAGE、轉模(mó)和Western Blot步驟。 注意用(yòng)HRP標記lgG或用一抗(kàng)-鏈親(qīn)和(hé)素-生物素-HRP夾法。
2、Western Blot最後一次洗模的同時配置發光(guāng)工作液:分別取等體積的A液和B液,放入幹淨容器中混合(注意吸取A液和B液(yè)的吸頭一定要分開,避免試劑汙染)。 建議立即使用工作液,室溫放置數小時後仍可(kě)使用但靈敏度有所降低。
3、Western Blot最後一次洗膜後,用鑷子將膜取出,用濾紙吸去(qù)多餘的洗滌液(切勿接觸膜的蛋白麵(miàn)),然後置(zhì)於一潔淨保鮮膜上或塑料容器內。
4、根據膜的(de)大小按比例滴加配置(zhì)好的ECL工作液到膜上,確保工作液均(jun1)勻覆蓋在膜上,放置1-3分鍾。
5、取膜,用濾紙吸去多餘的液體,將(jiāng)膜放在兩篇保鮮膜(mó)中間,隨後進(jìn)行壓片檢測或化學發光成像(xiàng)儀檢測(cè)。
6、壓片檢(jiǎn)測:將膜固定於X光膠片暗盒內(nèi)(注(zhù)意蛋(dàn)白麵向(xiàng)上)。 暗房內壓X光膠片,分別曝光不同(tóng)的時間,如數秒到數分鍾,顯影衝洗(xǐ)。
7、化學發光(guāng)成像(xiàng)儀檢測:將膜(mó)放置到化學發(fā)光成像儀內,參考儀器說明書進(jìn)行檢測。