小（xiǎo）鼠半乳糖凝集素-3(Galectin-3)ELISA Kit

小鼠半乳糖凝集素-3(Galectin-3)ELISA Kit

小鼠半乳糖凝（níng）集素-3(Galectin-3)ELISA Kit

樣本處（chù）理及要求：

1. 血清：全血（xuè）標本（běn）請於室溫放置2小時或4℃過夜（yè）後於1000g離心20分（fèn）鍾，取上清（qīng）即可檢（jiǎn）測，或將標本放於-20℃或-80℃保存（cún），但應避免反複凍融。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗（kàng）凝劑，標本采（cǎi）集（jí）後30分鍾內於2 - 8°C 1000g離心20分（fèn）鍾，或將標本放於-20℃或-80℃保存，但（dàn）應避免反複凍融。

3. 細胞培養物上清（qīng）或其它生物標本：1000g離心20分鍾，取上清即（jí）可檢測，或將標本放於-20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

注：標本溶血（xuè）會影響最後檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

需要而未提供的（de）試劑（jì）和器材：

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑（jì）準備：

試（shì）劑盒從冷藏環（huán）境中取出應在室溫平衡後（hòu）方可使用。

20×洗滌緩衝液的稀釋：蒸餾（liú）水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩衝液加19份蒸餾水。

操作步驟：

1. 從（cóng）室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出（chū）所需板條，剩餘板條用自封袋密封（fēng）放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的（de）標準品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣（yàng）本50μL；空白孔（kǒng）不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣（yàng）本孔中每孔加（jiā）入辣根過氧化物酶（HRP）標（biāo）記的（de）檢測抗體100μL，用封板膜封（fēng）住反（fǎn）應孔，37℃水浴（yù）鍋或恒溫箱溫（wēn）育60min。

5. 棄去液體，吸（xī）水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗（xǐ）滌液，吸水紙上拍幹，如此重複（fù）洗板5次（也可用（yòng）洗板機洗板）。

6. 每（měi）孔加入底物A、B各50μL，37℃避（bì）光孵育15min。

7. 每（měi）孔（kǒng）加入（rù）終止液50μL，15min內，在450nm波（bō）長處測定各孔（kǒng）的OD值。

注意事項：

1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保（bǎo）證準（zhǔn）確結果。所有試劑都必須（xū）在使用前達到（dào）室溫20-25℃。使用後立即（jí）冷藏保存（cún）試劑（jì）。

2. 洗板不正確可以導致（zhì）不（bú）準確的結（jié）果。在加入底（dǐ）物前確保盡量吸幹孔內液體。溫育過程中不要讓微孔幹燥掉。

3. 消除板（bǎn）底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底（dǐ）物顯色液應呈無色或很（hěn）淺的顏色，已經變藍的底物液（yè）不能使用。

5. 避免試劑和標本（běn）的（de）交叉汙染以（yǐ）免造成錯誤結（jié）果。

6. 在儲存和溫育時（shí）避免強光直接照（zhào）射。

7. 平衡至室（shì）溫後再打開密封袋以防水滴凝聚（jù）在（zài）冷板條上。

8. 任何反應試劑不能（néng）接觸漂白溶劑或漂（piāo）白溶劑所散發的強烈氣體。任（rèn）何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好（hǎo），按照規定的程序處理樣品和檢測裝置（zhì）。

洗（xǐ）板方法：

手工洗板（bǎn）方法：吸去（不可觸及（jí）板壁）或甩（shuǎi）掉酶標板內的液體；在實（shí）驗台上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝（cháo）下（xià）用力拍幾次；將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水（shuǐ）30（48T的20倍）倍稀（xī）釋後（hòu）備用。根據需要，重複此（cǐ）過程數次。

自動洗板：如果有自動（dòng）洗板機，應在熟練使用後再（zài）用到（dào）正式實驗過程中。

實（shí）驗（yàn）結果計算：

以所測標準品的（de）OD值（zhí）為橫（héng）坐標，標準品的濃度值為縱坐（zuò）標，在坐標紙上或用相（xiàng）關（guān）軟（ruǎn）件繪製標準曲（qǔ）線，並得到直線（xiàn）回歸方程，將樣品（pǐn）的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。