小鼠表皮（pí）細胞粘附分子(EPCAM)ELISA Kit

小鼠表皮細胞粘附（fù）分子(EPCAM)ELISA Kit

小鼠表（biǎo）皮細胞粘（zhān）附分子(EPCAM)ELISA Kit

樣本處（chù）理及要求：

1. 血清：全血標本請於室（shì）溫（wēn）放置（zhì）2小時或4℃過夜後（hòu）於1000g離心20分鍾，取上清即（jí）可檢測，或將標本放（fàng）於（yú）-20℃或-80℃保存，但應避免（miǎn）反複（fù）凍融。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作（zuò）為抗凝劑，標本采集後30分鍾內於2 - 8°C 1000g離心20分鍾，或將標本放於-20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融（róng）。

3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鍾，取上清即可檢測，或將（jiāng）標本放於-20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融（róng）。

注：標本溶血會（huì）影響最後檢測結果，因此溶血標本不宜（yí）進行此項檢測。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾（liú）水或去離子水

試劑準備：

試劑盒（hé）從冷藏環境中取出應在室溫平衡後方（fāng）可使用。

20×洗滌緩（huǎn）衝液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗（xǐ）滌緩衝液加19份蒸餾水（shuǐ）。

操作步驟（zhòu）：

1. 從室溫平衡20min後的鋁箔袋（dài）中取（qǔ）出所需板條，剩餘板條用自封袋密封放（fàng）回（huí）4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔（kǒng），標準品孔各加不同濃（nóng）度的標準（zhǔn）品50μL；

3. 樣本孔（kǒng）中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中（zhōng）每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水（shuǐ）浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液（yè），吸水（shuǐ）紙上拍幹，如此重複洗板5次（也可用（yòng）洗板（bǎn）機（jī）洗（xǐ）板）。

6. 每（měi）孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔（kǒng）加入（rù）終（zhōng）止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

注意事項：

1. 嚴格按（àn）照規定的時間和溫度進行溫育以（yǐ）保證準確結果。所有試劑（jì）都必須在使用前達（dá）到室溫20-25℃。使用（yòng）後立即（jí）冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確（què）可以導（dǎo）致不準確的結果。在加入底物前確保盡量（liàng）吸幹孔內液體。溫育過程中不要讓微孔幹燥掉。

3. 消除板底（dǐ）殘留的液體和手指印，否（fǒu）則（zé）影響OD值。

4. 底物顯色液應（yīng）呈無色或很淺的顏色（sè），已（yǐ）經變藍的底物液不（bú）能使用。

5. 避免試劑和標本的交（jiāo）叉汙染以免造成（chéng）錯誤（wù）結果。

6. 在儲（chǔ）存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫後再打開密封（fēng）袋（dài）以防水滴凝聚在冷板條上（shàng）。

8. 任何反（fǎn）應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中（zhōng）反應試劑的生物活（huó）性。

9. 不能使用過期產品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的（de）程序處理樣品和檢測裝置。

洗板方法：

手工洗（xǐ）板方（fāng）法：吸去（不可（kě）觸及板壁）或甩掉酶（méi）標板內的液（yè）體；在實驗台上（shàng）鋪（pù）墊（diàn）幾（jǐ）層吸水紙，酶（méi）標板朝下用力拍幾次；將（jiāng）30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後（hòu）備用。根據需要，重複此過程數（shù）次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用後再用到正式（shì）實（shí）驗過程中。

實（shí）驗結果計算：

以所測標（biāo）準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為（wéi）縱坐（zuò）標，在坐標紙上或用相關軟件繪製標準曲線（xiàn），並得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入（rù）方程，計算出樣品的濃度。