小鼠核因子kb(NFkb)ELISA Kit

小鼠核因子kb(NFkb)ELISA Kit

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樣本處理及要求：

1. 血清：全血標本請於室溫放置2小時或4℃過（guò）夜後於1000g離心20分鍾，取上清即可檢測，或將標本放於-20℃或-80℃保存，但（dàn）應避免反複凍融。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集後30分鍾內於2 - 8°C 1000g離心20分鍾（zhōng），或將標（biāo）本放於-20℃或-80℃保（bǎo）存（cún），但應避免反複凍融。

3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鍾，取上清即（jí）可檢（jiǎn）測，或將標本放於-20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

注：標本（běn）溶血（xuè）會影響最後檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

需要而未提供的試劑和器材（cái）：

1. 酶標儀（yí）（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒（héng）溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑準備：

試劑盒從冷藏環境中取出應（yīng）在室溫平衡後方可使（shǐ）用。

20×洗滌緩衝液的稀釋（shì）：蒸餾水按1：20稀釋，即1份（fèn）20×洗（xǐ）滌緩衝液加（jiā）19份蒸餾水。

操作步驟：

1. 從室溫平（píng）衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條，剩餘板條用自封袋密封（fēng）放回4℃。

2. 設置（zhì）標準品孔和樣本孔，標準品孔各（gè）加不同濃度的標準（zhǔn）品50μL；

3. 樣本孔中加入待測（cè）樣本50μL；空白孔（kǒng）不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入（rù）辣（là）根過氧化物酶（HRP）標記（jì）的檢測抗（kàng）體100μL，用封板膜封住（zhù）反應孔，37℃水浴鍋（guō）或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上（shàng）拍（pāi）幹，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物（wù）A、B各50μL，37℃避光孵育（yù）15min。

7. 每孔加入終（zhōng）止液50μL，15min內，在450nm波長（zhǎng）處測定各孔的OD值。

注意事項：

1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證（zhèng）準（zhǔn）確結果。所有試劑（jì）都必須在使用前達到室溫20-25℃。使（shǐ）用後立即冷（lěng）藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結（jié）果。在加入底物前確保盡量吸幹孔內液體。溫育過程中不要讓微孔幹燥掉。

3. 消除板底（dǐ）殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應（yīng）呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液（yè）不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉汙染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光（guāng）直接照射。

7. 平衡至室溫後再打開密封袋以防水滴凝聚在（zài）冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接（jiē）觸漂白溶劑或漂白溶（róng）劑所（suǒ）散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試（shì）劑的生物活性。

9. 不能使用過期產品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好（hǎo），按照規定的程序處理樣品和檢測裝（zhuāng）置。

洗板方法：

手工（gōng）洗板方法：吸去（不可觸及板壁（bì））或甩掉酶標板內的液體；在實驗台（tái）上鋪墊幾層（céng）吸水（shuǐ）紙，酶標板朝下用力拍幾次；將30（48T的20倍（bèi））倍濃縮洗（xǐ）滌液用蒸餾（liú）水30（48T的（de）20倍）倍（bèi）稀釋（shì）後備用。根據需要，重複此過程（chéng）數次。

自動洗板：如（rú）果有自動洗板機，應在熟練使用後再用到正式（shì）實驗過（guò）程中。

實驗結果計算：

以所測標準品的OD值為橫坐（zuò）標，標準品的濃（nóng）度值（zhí）為縱坐（zuò）標，在坐標紙上（shàng）或用相關（guān）軟件繪製標準曲線，並得（dé）到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的（de）濃度。