人內皮素4(ET-4)ELISA Kit

人（rén）內皮素4(ET-4)ELISA Kit

人內皮素4(ET-4)ELISA Kit

樣本處理及要求：

1. 血清：全血標本請於（yú）室溫放置2小時或4℃過（guò）夜後於1000g離心20分鍾，取上清即可檢（jiǎn）測，或（huò）將標本放於-20℃或-80℃保存，但應避（bì）免反複凍（dòng）融。

2. 血漿：可（kě）用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集後（hòu）30分鍾內於（yú）2 - 8°C 1000g離心20分鍾，或將標本放（fàng）於（yú）-20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

3. 細胞培（péi）養物上清或其它生物（wù）標（biāo）本：1000g離心20分鍾，取上清即（jí）可檢（jiǎn）測，或將標本放（fàng）於（yú）-20℃或（huò）-80℃保存，但應（yīng）避免反複凍融。

注（zhù）：標（biāo）本溶血會（huì）影響最後檢測結果（guǒ），因此溶血標本不宜進行此項（xiàng）檢測。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑準備：

試劑盒從冷藏環境中取（qǔ）出應在室溫平衡後方可使用。

20×洗滌緩衝液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩衝（chōng）液加19份蒸餾水。

操作步驟：

1. 從室溫平衡20min後的（de）鋁箔袋中取（qǔ）出所需板條，剩餘（yú）板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本（běn）50μL；空白孔（kǒng）不加。

4. 除空白孔外，標準品（pǐn）孔和樣本（běn）孔中每（měi）孔加入辣根（gēn）過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應（yīng）孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫（wēn）育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗（xǐ）滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板5次（也可（kě）用洗板機洗（xǐ）板）。

6. 每孔加（jiā）入底（dǐ）物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔（kǒng）加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測（cè）定各孔的OD值。

注意事項：

1. 嚴格按照規定的時（shí）間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使（shǐ）用後（hòu）立即冷藏保存試劑。

2. 洗板（bǎn）不正（zhèng）確可以導致不（bú）準確的結果（guǒ）。在加入底（dǐ）物前確保盡量吸幹孔內液體。溫育過程中不要（yào）讓微孔幹燥掉。

3. 消除板（bǎn）底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應（yīng）呈無色或很淺的顏色，已經（jīng）變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本（běn）的交叉汙染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫（wēn）後再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任（rèn）何反應試（shì）劑（jì）不（bú）能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞（huài）試劑盒中（zhōng）反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產品。

10. 如果可能傳（chuán）播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定（dìng）的程序處理樣品和檢測裝置。

洗板方（fāng）法：

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶（méi）標板內的液體；在實驗台上（shàng）鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀（xī）釋（shì）後備用。根據需要，重複此過程數次。

自動洗（xǐ）板：如果有自動洗板機，應（yīng）在熟練使用（yòng）後再用到正式實驗過程中。

實驗結果計算：

以所測標準品的OD值為橫坐標，標（biāo）準品（pǐn）的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用（yòng）相關軟件繪製標（biāo）準曲線，並得（dé）到（dào）直線回（huí）歸方程，將樣（yàng）品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。